Salute e malattia
Gli anticorpi anti-actina sono usati per rilevare la presenza della proteina actina. È usato esclusivamente per scopi di ricerca biologica o medica, o in laboratori di patologia diagnostica. L'actina è studiata principalmente da scienziati che indagano il muscolo o altri sistemi associati, come la citochinesi o le proteine leganti. Tuttavia, poiché è la proteina più abbondante nelle cellule eucariotiche — tipi cellulari più complessi contenenti strutture interne note come organelli — è spesso usata come controllo positivo per esperimenti focalizzati su altri tipi di proteine.
La proteina actina è molto strettamente, o "altamente", conservata attraverso diversi organismi, dalle alghe e batteri a cani e umani. Esiste come singole unità proteiche, o monomeri, che devono essere unite insieme per formare la proteina globulare più grande. L'actina è necessaria per fare filamenti nelle cellule per il movimento della cellula così come per il movimento degli organelli dentro la cellula. È quindi essenziale per processi cellulari di base, come la motilità e la divisione cellulare.
Gli anticorpi anti-actina sono tra gli strumenti di biologia cellulare più routinariamente e ampiamente usati. La loro applicazione a esperimenti usando immunoistochimica, western blotting, immunoprecipitazione, ELISA e citometria a flusso, ha una lunga storia ben documentata di successo. La maggior parte delle aziende che producono e vendono anticorpi per scopi di ricerca producono anticorpi primari che possono essere collegati a una molecola colorata o fluorescente, o che devono essere riconosciuti da un anticorpo secondario collegato a una di queste molecole visibili.
L'actina è un componente essenziale della produzione di ribonucleico messaggero della cellula, quindi è solitamente presente in quantità significative nel nucleo. La sua presenza qui può essere usata come controllo positivo per esperimenti IHC o ICC. L'actina è rilevata usando anticorpi che riconoscono i suoi acidi amino componenti. L'osservazione visiva che l'anticorpo anti-actina è stato rilevato prova che il protocollo usato è stato eseguito o formulato correttamente. La colorazione con anticorpi anti-actina serve come controllo positivo per altra colorazione con anticorpi per rilevare altri tipi di proteine, sia per ricerca che per diagnosi mediche.
Il western blotting è un metodo di rilevazione e quantificazione proteica usando procedure scientifiche come elettroforesi su gel, immunoblotting e ibridazione con anticorpi. La proteina di interesse e la proteina actina sono elettroforesate attraverso un gel, che permette a proteine di dimensioni diverse di separarsi lungo un gradiente di dimensioni. Le singole proteine sono poi trasferite su una membrana speciale, dove diventano immobilizzate. Gli anticorpi anti-actina sono applicati alla membrana per rilevare la proteina actina immobilizzata, servendo di nuovo come controllo positivo per il rilevamento della proteina di interesse. Poiché una massa nota di proteina actina è solitamente usata, è possibile confrontare questo numero con quello della proteina di interesse e così determinarne la quantità.
Di nuovo, poiché gli anticorpi anti-actina sono così routinariamente usati e ben studiati, la loro unica capacità di legarsi strettamente all'actina e la loro nota proprietà di dimensioni sono sfruttate come controlli positivi in esperimenti di immunoprecipitazione. Interazioni che avvengono dentro una cellula possono essere studiate lisando la cellula — facilitandone la disintegrazione — e raccogliendo il risultante lisato, che è essenzialmente una "zuppa" di diverse proteine. Legando anticorpi contro una proteina di interesse e actina, e poi applicando la miscela a una colonna, è possibile purificare la proteina legata all'anticorpo e l'actina legata all'anticorpo da altre proteine indesiderate. Il rilevamento delle proteine actina dall'anticorpo anti-actina serve come prova che la procedura di immunoprecipitazione ha avuto successo.
Ricerca medica