Salute e malattia
L'elettroforesi su gel è una tecnica standard per separare DNA, RNA o proteine attraverso un gel usando corrente elettrica. Usa la carica elettrica delle molecole per separarle nel gel mediante corrente elettrica.
Il gel di agarosio è il metodo più comune per visualizzare DNA. Percentuali diverse di agarosio secondo dimensione DNA da visualizzare. Bassa percentuale (es. 0,7%) risolve frammenti DNA grandi. Percentuale alta (es. 2%) per frammenti piccoli. Per visualizzare DNA, spesso si usa bromuro di etidio: intercala con DNA e fluoresce sotto UV.
Gel di poliacrilammide separano frammenti DNA da 10 paia di basi fino a 1 kb. Range di separazione piccolo ma alta risoluzione. Più complessi da preparare. Possibile caricare grandi quantità DNA senza influenzare risoluzione. Come per agarosio, bromuro di etidio usato per visualizzare, ma la poliacrilammide può spegnere la fluorescenza, rendendo difficile visualizzare piccole quantità DNA.
Per separare grandi molecole DNA, spesso per genotipizzazione. Grandi frammenti migrano a velocità simile → difficile risolvere bande diverse. L'elettroforesi a campo pulsato alterna il campo elettrico. Permette maggiore separazione e risoluzione del DNA.
Metodo rapido e sensibile per separare DNA. Piccole quantità risolvibili. Visualizzazione con marcatura fluorescente o luce UV.
La struttura del DNA può complicare la separazione. Urea e formamide possono distruggere la struttura abbassando il punto di fusione del DNA. Usabile in gel di agarosio e poliacrilammide.
Il metodo dipende dalla dimensione dei frammenti DNA da separare. L'uso del DNA dopo la separazione determinerà il metodo finale.
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