Salute e malattia
La citofluorimetria (flow cytometry) è uno strumento utile nello studio delle proteine cellulari. Utilizza l'emissione di luce o fluorescenza dalle proteine all'interno della cellula. Anticorpi o sonde marcate con fluorescenza sono usati per studiare proteine specifiche. La citofluorimetria è usata per diagnosticare una serie di malattie, incluso il cancro, ma è anche utile nella ricerca medica.
Le cellule dovrebbero essere fissate per mantenere la stabilità delle proteine intracellulari. Possono essere usati diversi fissativi come formaldeide o acetone ghiacciato. Dopo la fissazione, la membrana cellulare deve essere permeabilizzata per permettere all'anticorpo di entrare nella cellula. Detergenti come Triton o NP-40, o metanolo ghiacciato possono essere usati per creare pori nella membrana cellulare.
Lavare le cellule nel tampone di blocco 0,5% albumina sierica bovina diluita in soluzione salina tamponata con fosfato (BSA/PBS). Le cellule vengono incubate nel tampone di blocco per ridurre il legame aspecifico. Aggiungere l'anticorpo primario diluito nel tampone di blocco e lasciare incubare a temperatura ambiente per il tempo ottimizzato. Lavare con tampone di blocco.
Incubare l'anticorpo secondario, che è marcato con un tag fluorescente, a temperatura ambiente per 30 minuti. Per rimuovere l'anticorpo non legato, lavare le cellule in tampone di blocco. Centrifugare le cellule in un pellet e poi risospendere in PBS e analizzare al citofluorimetro.
Ricerca medica