Salute e malattia
Il saggio di legame competitivo è un esperimento che determina la capacità di legame di proteine o sostanze chimiche per proteine specializzate presenti sulla superficie cellulare, chiamate recettori. Il metodo è spesso usato nella ricerca medica ma è anche in grado di determinare quali farmaci si legano ai recettori e modificano l'attività recettoriale, che a sua volta può alterare il comportamento cellulare.
Ri-sospendere le cellule in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) ghiacciata. Misurare la concentrazione proteica per confermare livelli proteici uguali usando un saggio proteico commercialmente disponibile specializzato.
Aggiungere una proteina nota per legarsi al recettore, il ligando, marcata con radioattività, alla sospensione cellulare o tissutale. Aggiungere il competitore, che è il farmaco o la proteina in studio, e incubare con il ligando radioattivo e la sospensione cellulare. Si dovrebbe studiare una gamma di concentrazioni del farmaco in test. Dopo l'incubazione, separare ligando legato e non legato e misurare la radioattività.
La misura usuale da determinare è la metà della concentrazione massima che inibisce il recettore, altrimenti nota come IC50. Questo viene calcolato tracciando le concentrazioni su una scala logaritmica sull'asse X di un grafico mentre l'asse Y rappresenta la percentuale di inibizione; dovrebbe essere generata una curva sigmoidale (a forma di S). L'IC50 è il punto di inibizione del 50%, e la concentrazione corrispondente può essere letta dal grafico.
Ricerca medica