Protocollo colorazione DAPI: guida completa per imaging cellulare

DAPI sta per la sostanza chimica 4'-6-Diamidino-2-fenilindolo, ed è usata per colorare il DNA a doppio filamento. Il composto forma complessi blu fluorescenti con i nuclei delle cellule ed è quindi comunemente usato per evidenziare la struttura delle cellule. Il tipo e la densità della colorazione possono anche identificare cellule morte o morenti.

Preparazione soluzione DAPI

• La soluzione DAPI deve prima essere diluita a una soluzione di lavoro. Per esempio, 10 mg del prodotto DAPI Invitrogen devono essere mescolati con 2 mL di acqua deionizzata, e poi ulteriormente diluiti a concentrazione 300 nano-Molare (le istruzioni saranno presenti sul prodotto) con salina fosfato-tampone (PBS).

Preparazione del campione

• Fissare il campione come appropriato al tipo di campione da testare su un vetrino. Aggiungere 300 microlitri della soluzione di lavoro DAPI al campione e incubare per uno-cinque minuti. Sciacquare il vetrino con PBS.

Analisi

• Usare un microscopio a fluorescenza per osservare il campione montato su vetrino. I nuclei colorati con DAPI possono essere identificati da una fluorescenza blu.