Estratto fegato nel test di Ames: ruolo nell'attivazione metabolica di promutageni
Scopo del test di Ames
Il test di Ames usa ceppi Salmonella typhimurium per rilevare composti mutageni. Molte sostanze chimiche (promutageni) richiedono conversione metabolica per diventare mutageni.
Frazione S9 fegato
- Preparata da fegato roditore indotto con Aroclor 1254 o fenobarbital.
- Contiene enzimi Fase I (CYP450, FMO) e Fase II (GST, UGT, SULT) più cofattori (NADPH, UDPGA, PAPS, GSH).
- Mima metabolismo epatico mammifero in vitro.
Come funziona
- Composto test + batteri + mix S9 + cofattori → incubazione.
- Enzimi convertono promutagene → elettrofilo reattivo.
- Elettrofilo danneggia DNA batterico → colonie revertanti (his⁺).
- Relazione dose-risposta indica potenza mutagenica.
Significato
Senza S9, solo mutageni ad azione diretta sono rilevati. Con S9, il test identifica composti che richiedono attivazione metabolica (es. aflatossina B1, benzo[a]pirene, 2-acetilaminofluorene). È standard regolatorio per screening genotossicità.