Salute e malattia
Il TPA (attivatore del plasminogeno tissutale) è una serin-proteasi che degrada i coaguli di fibrina. Prodotto dalle cellule endoteliali, è cruciale nella ricerca su ictus, embolia polmonare, infarto miocardico. La purificazione isola questa proteina da altre molecole tramite cromatografia ed elettroforesi.
Usato in studi di fibrinolisi (processo di degradazione della fibrina, legato a formazione tumorale). Estrazione da rene di maiale essiccato all'acetone con tampone acetato di potassio pH 4,2. Precipitazione con solfato d'ammonio. Cromatografia su n-butil-sefarosio e Concanavalina A per separare le proteine.
La purezza proteica è critica per esperimenti biologici. TPA purificato è anche commercialmente disponibile, risparmiando tempo e riducendo rischi. Protocollo: precipitazione campioni, filtrazione, cromatografia di affinità e su gel, analisi comparativa prima della produzione commerciale.
Lisati cellulari chiarificati su colonna lisina-Sepharose, cromatografia, lavaggio con soluzione cloruro di sodio. Secondo carico su colonna con proteine ad alta affinità per TPA. Campione mescolato con zinco-Sepharose. Risultato: purezza >90% (secondo Applied and Environmental Microbiology).
Avvelenamento