Immunoistochimica (IHC): Guida Completa alla Tecnica e Applicazioni

L'immunoistochimica (IHC) è una tecnica di laboratorio che utilizza anticorpi per rilevare antigeni specifici in sezioni di tessuto, permettendo l'identificazione e localizzazione di proteine cellulari al microscopio. Fondamentale in anatomia patologica, ematologia, oncologia, istologia.

Principi di Base

Cellule e Antigeni

Le cellule presentano proteine di membrana (antigeni) che ne definiscono il tipo e lo stato. Neoplasie esprimono antigeni alterati o neopatici. L'IHC rileva questi marcatori.

Anticorpi

Proteine prodotte dai linfociti B in risposta ad antigeni estranei. Ogni anticorpo lega specificamente il suo antigene (chiave-serratura). In IHC si usano anticorpi primari (contro il target) e secondari (contro il primario, coniugati con marker di rivelazione).

Metodica

1. Preparazione: Tessuto fissato (formalina), incluso in paraffina (FFPE) o congelato, tagliato a sezioni sottili (3-5µm) su vetrino.
2. Recupero antigenico (Antigen Retrieval): Calore (citrato/EDTA) o enzimi per esporre epitopi mascherati dalla fissazione.
3. Blocco aspecifico: Siero normale/BSA per ridurre legami inespecifici.
4. Incubazione anticorpo primario: Specifico per l'antigene target (es. Ki-67, ER, PR, HER2, CD20, PSA).
5. Incubazione anticorpo secondario + sistema di rivelazione: Polimero coniugato con perossidasi (HRP) o fosfatasi alcalina (AP).
6. Cromogeno: DAB (marrone), AEC (rosso), Fast Red. Contrastante: ematossilina (blu nuclei).
7. Montaggio e lettura: Microscopia ottica. Valutazione qualitativa (positivo/negativo) e quantitativa (H-score, Allred, % cellule positive).

Sistemi di Rivelazione

• Cromogeni cromogenici (HRP/DAB): Microscopia campo chiaro. Standard diagnostico.
• Fluorescenza (immunofluorescenza): Anticorpi coniugati fluorocromi (FITC, TRITC, Alexa Fluor). Microscopia a fluorescenza/confocale. Permette multiplo (co-localizzazione).
• Isotopi radioattivi / metalli (IMC - Imaging Mass Cytometry): Per citometria di massa su tessuto (CyTOF).

Applicazioni Cliniche Chiave

• Oncologia: Diagnosi (tipo istologico), prognosi (Ki-67), predizione risposta terapia (ER/PR/HER2 in mammella, PD-L1, MSI/dMMR), origine primitiva (CUP).
• Ematopatologia: Fenotipizzazione linfomi/leucemie (CD3, CD20, CD10, BCL2, BCL6, MUM1, Ciclina D1, Kappa/Lambda).
• Patologia infettiva: Identificazione agenti (HPV, CMV, EBV, HSV, micobatteri).

Carriere

Tecnici di laboratorio biomedico / Istotecnici: Preparazione campioni, taglio, colorazioni (IHC, speciali). Laurea triennale (Classe L/SNT3).
Citologi / Citotecnici: Screening strisci (Pap test, liquid-based), agoaspirati. Corso post-laurea.
Patologi (Medici): Diagnosi finale su vetrini IHC. Specializzazione in Anatomia Patologica.