Protocollo di trasfezione GFP: guida completa per ricercatori

L'uso della Proteina Fluorescente Verde ha rivoluzionato la biologia molecolare e cellulare; ha permesso ai ricercatori di visualizzare cellule e proteine in modi mai prima possibili. Il suo impatto sulla ricerca scientifica è stato così profondo che nel 2008 Osamu Shimomura ha vinto il Premio Nobel per la Chimica per la sua scoperta e isolamento della GFP da meduse fluorescenti.

Definizioni

• Un gene è la sequenza di acido desossiribonucleico nelle cellule responsabile per la produzione di una proteina specifica. Un plasmide è un pezzo separato di DNA che contiene un gene di interesse come la GFP. La trasfezione è il metodo per introdurre un plasmide nelle cellule.

Metodi

• La trasfezione tipicamente implica mescolare un plasmide DNA contenente un gene come la GFP con lipidi o sali. Le cellule sono esposte a questa soluzione, che crea buchi nella membrana cellulare, permettendo al plasmide di entrare nella cella dove il gene può essere espresso come proteina. Kit di trasfezione commerciali sono disponibili, o i reagenti possono essere fatti in laboratorio. La scelta del metodo di trasfezione dipende dal tipo di cellule e plasmidi usati. La GFP è visualizzata e monitorata con attrezzature che rilevano la fluorescenza.

Usi

• La GFP è solitamente attaccata a una proteina di interesse per la trasfezione. Il Comitato Nobel ha evidenziato il tracciamento del "danno alle cellule nervose durante la malattia di Alzheimer" e "come le cellule beta produttrici di insulina sono create nel pancreas di un embrione in crescita" come esempi.